原理：

　　儲液器中的流動相被高壓泵打入檢測系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內，由于樣本溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的“吸附-解吸”的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣本濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式輸出檢測結果。

　　根據分離機制的不同，HPLC原理可分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與反相）、離子交換色譜法及分子排阻色譜法。

　　梯度高效液相色譜儀對流動相的要求為：

　　1、選用的溶劑應當與固定相互不相溶，并能保持色譜柱的穩定性。

　　2、選用的溶劑應有高純度，以防所含微量雜質在柱中積累，引起柱性能的改變。

　　3、選用的溶劑性能應與所使用的檢測器相匹配，如果使用紫外吸收檢測器，就不能選用在檢測波長下有紫外吸收的溶劑；若使用示差折光檢測器，就不能用梯度洗脫。

　　4、選用的溶劑應對樣品有足夠的溶解能力，以提高測定的靈敏度。

　　5、選用的溶劑應具有低的黏度和適當低的沸點。

　　6、應盡量避免使用具有顯著毒性的溶劑，以保證工作人員的安全。